‘壹’ 跪求万级、十万级GMP净化车间安全管理制度
无菌室标准化规程及验收规范
一．目的
本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。
二．适用范围
微生物检测实验室
三．责任者 QC主管生测员
四．定义 无
五．安全注意事项
严格无菌操作，防止微生物污染；操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。
六．建造规程
1. 无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。
2. 无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。
3. 严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。
4. 无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5％的甲酚溶液，70％的酒精，0.1％的新洁尔灭溶液，等等。
5. 无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。
6. 需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。
7. 工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。
8. 无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌20分钟。
9. 供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70％的酒精棉球消毒外表面。
10. 每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。
11. 吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。
12. 接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。
13. 带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24小时后取出冲洗。
14.如有菌液洒在桌上或地上，应立即用5%石碳酸溶液或3％的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。
15.凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。
16. 无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15ml，放至凝固后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3～5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。
七．参照 《药品卫生检验方法》 《中国药品检验标准操作规范》中 (无菌检查法)章节 中华人民共和国医药行业标准 YY/T0188.6-1995《药品检验操作规程》
八．适用部门
质量管理部
无菌室技术指导说明
在获得了无菌环境和无菌材料后，我们还要保持无菌状态，才能对某种特定的已知微生物进行研究或利用它们的功能，否则外界的各种微生物很容易混入。外界不相干的微生物混入的现象，在微生物学中我们叫做污染杂菌。防止污染是微生物学工作中十分关键的技术。一方面是彻底灭菌，另一方面防止污染，是无菌技术的两个方面。另外，我们还要防止所研究的微生物，特别是致病微生物或经过基因工程改造了的本来自然界不存在的微生物从我们的实验容器中逃逸到外界环境中去。为了这些目的，在微生物学中，有许多措施。
无菌室一般是在微生物实验室内专辟一个小房间。选用彩钢板及钢化玻璃建造。面积不宜过大，约 5 — 20 平方米即可，高 2.5 米左右。无菌室外要设一个缓冲间，缓冲间的门和无菌室的门不要朝向同一方向，以免气流带进杂菌。无菌室和缓冲间都必须密闭。室内装备的换气设备必须有空气过滤装置。无菌室内的地面、墙壁必须平整，不易藏污纳垢，便于清洗。工作台的台面应该处于水平状态。无菌室和缓冲间都装有紫外线灯，无菌室的紫外线灯距离工作台面 1 米。工作人员进入无菌室应穿灭过菌的服装，戴帽子。
当前无菌室多存在于微生物工厂，一般实验室则使用超净台。超净台其主要功能是利用空气层流装置排除工作台面上部包括微生物在内的各种微小尘埃。通过电动装置使空气通过高效过滤器具后进入工作台面，使台面始终保持在流动无菌空气控制之下。而且在接近外部的一方有一道高速流动的气帘防止外部带菌空气进入。
无菌操作技术当前不仅在微生物学研究和应用上起着举足轻重的作用，而且在许多生物技术中也被广泛应用。例如转基因技术、单克隆抗体技术等。
无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，操作去洁净度100级或防止同等级别的超净工作台，室内温度控制18-26摄氏度，相对湿度45%-65%。无菌室应采光良好，避免潮湿，远离厕所寄污染区。面积一般不超过10平方米，不小于5平方米。高度不超过2.4米，由1-2个缓冲间，操作间组成（操作间和缓冲间的门不应直对）。
无菌室使用表
使用日期 压差（Pa） 温度（℃） 湿度（%） 电源情况 签 名
‘贰’ 药厂进入洁净区人员应注意什么
人员进入洁净区必需遵循下列要求：
1、更衣室是操作者进入生产岗位更衣的场所，非生产操作人员未经部门负责人允许不得擅自进入。
2、进出更衣室必须先换上工作鞋，更换下的鞋应存放在指定的鞋架上，不得随意放置。
3、进出更衣室必须关好一道门，违者将给予处罚。
4、更衣室内换下的衣服，必须存放在各自的更衣柜内，不得悬挂在更衣柜外。
(2)gmp什么级别需要戴一次性手套扩展阅读
药厂洁净区划分ABCD级的标准：
A级：高风险操作区，如：灌装区、放置胶塞桶、敞口安瓿瓶、敞口西林瓶的区域及无菌装配或连接操作的区域。
通常用层流操作台（罩）来维持该区的环境状态。层流系统在其工作区域必须均匀送风，风速为0.36-0.54m/s（指导值）。应有数据证明层流的状态并须验证。在密闭的隔离操作器或手套箱内，可使用单向流或较低的风速。
B级：指无菌配制和灌装等高风险操作A级区所处的背景区域。
C级和D级：指生产无菌药品过程中重要程度较低的洁净操作区。
‘叁’ 2010版中国GMP怎么规定洁净区的洁净级别 A,B,C,D标准是什么,
无菌药品生产所需的洁净区可分为以下4个级别：
A级：高风险操作区,如灌装区、放置胶塞桶和与无菌制剂直接接触的敞口包装容器的区域及无菌装配或连接操作的区域,应当用单向流操作台（罩）维持该区的环境状态.单向流系统在其工作区域必须均匀送风,风速为0.36-0.54m/s（指导值）.应当有数据证明单向流的状态并经过验证.
在密闭的隔离操作器或手套箱内,可使用较低的风速.
B级：指无菌配制和灌装等高风险操作A级洁净区所处的背景区域.
C级和D级：指无菌药品生产过程中重要程度较低操作步骤的洁净区.
以上各级别空气悬浮粒子的标准规定如下表：
洁净度级别 悬浮粒子最大允许数/立方米
静态 动态(3)
≥0.5μm ≥5.0μm(2) ≥0.5μm ≥5.0μm
A级(1) 3520 20 3520 20
B级 3520 29 352000 2900
C级 352000 2900 3520000 29000
D级 3520000 29000 不作规定 不作规定
注：
（1）为确认A级洁净区的级别,每个采样点的采样量不得少于1立方米.A级洁净区空气悬浮粒子的级别为ISO 4.8,以≥5.0μm的悬浮粒子为限度标准.B级洁净区（静态）的空气悬浮粒子的级别为ISO 5,同时包括表中两种粒径的悬浮粒子.对于C级洁净区（静态和动态）而言,空气悬浮粒子的级别分别为ISO 7和ISO 8.对于D级洁净区（静态）空气悬浮粒子的级别为ISO 8.测试方法可参照ISO14644-1.
（2）在确认级别时,应当使用采样管较短的便携式尘埃粒子计数器,避免≥5.0μm悬浮粒子在远程采样系统的长采样管中沉降.在单向流系统中,应当采用等动力学的取样头.
（3）动态测试可在常规操作、培养基模拟灌装过程中进行,证明达到动态的洁净度级别,但培养基模拟灌装试验要求在“最差状况”下进行动态测试.
‘肆’ haccp规定什么情况必须戴手套
1、HACCP体系食品生产企业通用要求中，是否戴手套等属于前提计划类的卫生标准操作程序及良好生产规范中的要求；因为该标准是通用的，没有明确哪一类企业应该在什么情况下戴手套；
2、与HACCP体系配套使用的GB14881-2013中，对于手套的要求在工作服的管理时提出，应根据食品的特点及生产工艺的要求配备专用工作服，必要时还可配备口罩、围裙、套袖、手套等；
3、配备手套的目的是防止接触到的食品受到污染或者人手受到伤害（如酸碱等），手套应当作为与产品接触面进行严格管理，在GB/T2731中明确要求，接触食品的器具、手套和内外包装材料等应清洁、卫生和安全；
4、在具体的食品企业卫生规范中有不同的规定，如GB19303《熟肉制品企业生产卫生规范》中明确提出用于接触熟产品操作时应使用一次性手套。
5、由此可见，一般产品直接入口的情况下，如果直接用手接触会影响到食品的口感、保存、一致性等质量或对人手造成损伤（如酸性较大的高盐高酸产品或操作时高温的产品等）的，应戴手套，特定情况下应戴一次性手套。但是不管是否戴手套，手的清洗与消毒是一定要做的。
‘伍’ gmp车间洁净级别
A 级：高危操作区，如罐装区、置放胶塞桶和与无菌药品直接碰触的敞口包装材料的区域及无菌装配或接入操作的区域，应该用单向流操作台（罩）保持该区的环境状态。
C 级和D 级：指无菌制剂加工过程中主要程度较低操作流程的净化区。
以上各级别气体浮悬粒子的标淮与ISO14644-1中降尘量（以≥0.5μm和≥5μm的浮悬粒子为底限标淮）的关系。
‘陆’ GMP对人员卫生管理的基本要求
1.员工诮当穿着适合其所从事生产操作的干净服装，必要时应当更换。其它保护性用品如头、脸、手和臂等遮护用品必要时也应当佩带，以免原料药和中间体受到污染。
2. 员工应当避免与中间体或原料药的直接接触。 3.吸烟、吃、喝、咀嚼及存放食品公限于与生产区隔开的指定区域。
4.患传染性疾病或身体表面有开放性创伤的员工不应当从事危及原料药质量的生产活动。在任何时候（经医学检验或监控检查）任何患有危及原料药质量的疾病或创伤的人员都不应当参与作为，直到健康状况已恢复，或者有资格的医学人员确认该员工不会危及到原料药的安全性和质量。
gemro Services ltd
www.gemroservices.com
gemro是中德合资的国际GMP咨询公司，从事专业的GMP咨询业务，包括确认与验证，设计评审，风险分析，差距分析，符合性审计，现场审计，陪同审计，DMF/CEP文件编写，HACCP风险分析，清洁验证，计算机系统验证，培训等相关的服务。
‘柒’ 请问新版GMP中的A、B、C、D级洁净区级别与百级区、万级区、十万级区区别
1. 区别：
GMP中A、B、C、D级控制上有动静态之分，而百级、万级、十万级则基本无动静态之分，两者之间有着明显的差异。
新版GMP参照ISO14644中规定具体标准如下：
洁净度级别 悬浮粒子最大允许数/立方米 静态 动态（3） ≥0.5μm ≥5μm(2) ≥0.5μm ≥5μm ；
A级：3520[url=12/] 20 3520 20
B级 ：3520 29 352000 2900[url=89/]
C级 ：352000 2900 3520000 29000
D级 ：3520000 29000 不作规定。
2.联系：
A级对应的是动态百级，即在动态条件下应仍为百级 。
B级对应的是静态百级，即在静态条件下满足百级即可，在动态条件下可以符合万级标准，GMP里面没有所谓千级的说法。
C级对应万级，静态条件下符合万级标准，动态条件下符合D级标准，即十万级 D级对应十万级。
3.不能换算，因为计算方式和要求不同。
ABCD级别的划分是参照ISO标准（欧盟采纳的方式），其本身包含了静态要求和动态要求。
旧版GMP采纳的是美国的洁净间划分方式，旧版的洁净间划分仅有静态的概念，不要求动态。
在ABCD体系中，A级静态和动态都等同于ISO4.8级，即A级是按照动态来要求的。
从B级开始，静态和动态之间差一到二个级别。
B级静态为ISO5，动态ISO7,C级静态ISo7，动态ISO8，到了D级，级别已经比较低，因此没有动态要求，只有静态要求为ISO8。
如果要把百级换算成ISO体系，等同于ISO5，万级等同于ISO7，十万级等同于ISO8，三十万级在国外没有采纳。但是旧版GMP的洁净间概念与新版之间无法。
(7)gmp什么级别需要戴一次性手套扩展阅读：
1. 新版GMP 净化车间（无菌室、无尘室） A ,B,C,D 各对应等级：
A级为单向流，不考虑换气次数。
B级换气次数大于50次。
C级换气次数大于25次。
D级换气次数大于15次。
2.实施新版GMP，企业应该如何有效规划技改资金投入？
新修订的药品GMP由于整体标准的提高，贯彻落实确实需要企业投入一定资金进行技术改造。
GMP软件的提高等需要相应的投入；为了提高员工素质，企业需要增加培训费用；为了加强软件管理，企业需要增加管理人员，会增加工资支出；无菌药品GMP硬件的提高，会增加企业制造成本。
对于技术改造投资问题，由于各企业基础不同，生产品种不同，投资也不一样。
从各个细分领域看，硬件投资主要集中在无菌药品，尤其是冻干粉针剂没有最终灭菌环节，生产过程无菌保障水平必须提高。其他如口服制剂等不作无菌要求的产品基本不涉及硬件改造。
网络-GMP