① 人穿過的衣服能提取DNA嗎
沒有洗過的話,是有可能提取到的,因為汗漬等會殘留在衣服上面
② 怎麼做衣服上的DNA
學術上講。做衣服上的DNA是對衣服上所散落的皮膚組織。指甲,毛發。體液(汗水。唾液。精液,血液)進行提取然後在儀器上進行DNA測驗。費用極高
③ DNA怎麼提取
DNA提取主要是CTAB方法,其他的方法還有物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法。化學方式如異硫氰酸胍法、鹼裂解法。生物方式:酶法。根據核酸分離純化方式的不同有;硅質材料、陰離子交換樹脂等。
提取DNA總的原則:
1.保證核酸一級結構的完整性;
2.核酸樣品中不應存在對酶有抑製作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子;
3.其他生物大分子如蛋白質、多糖和脂類分子的污染應降低到最低程度;
4.其他核酸分子,如RNA,也應盡量去除。
例如 : 用酶法提取
DNA提取分為三個基本步驟,每個步驟的具體方法可根據樣品種類、影響提取的物質以及後續步驟的不同而有區別。
工具/原料: 研磨棒、研磨儀或者組織破碎儀 , 氯仿:異戊醇(24:1)或者蛋白酶 , RNA酶 , 酒精 , 冰箱
方法/步驟 :
使用研磨儀、研磨棒或者使用超聲破碎細胞的方法破碎細胞,加入去污劑,如sds等,除去膜脂。
去除細胞內的蛋白質,包括與DNA結合的組蛋白,通過加入蛋白酶,醋酸鹽沉澱,或者酚/氯仿抽提等方法去除。
加入RNA酶去除RNA,如實驗不嚴密,可省略此步。
沉澱DNA,需在冷乙醇或異丙醇中沉澱,放在冰箱-20℃沉澱30分鍾以上,原理是DNA在醇中不可溶而黏在一起發生沉澱。
總結: DNA提取方法有下面⑦種
一.酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎細胞,消化蛋白,然後用酚和酚-氯DNA大小為100-150kb
二.甲醯胺解聚法:破碎細胞同上,然後用高濃度甲醯胺解聚蛋白質與DNA的結合,再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。
三.玻璃棒纏繞法:用鹽酸胍裂解細胞,將裂解物鋪於乙醇上,然後用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪,DNA沉澱液繞於玻棒。生成DNA約80kb。
四.異丙醇沉澱法:基本同1法,僅用二倍容積異丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在異丙醇中可溶狀態)
五.表面活性劑快速制備法:用Triton X-100A或NP40表面活性劑破碎細胞,然後用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉澱或透析。
六.加熱法快速制備:加熱96℃-100℃,五分鍾,然後離心後取上清,可用於PCR反應。
七.鹼變性快速制備:先用NaOH作用20分鍾,再加HCI中和,離心後取上清,含少量DNA。
④ 枕巾被單枕套上面能提取到dna嗎
(一)Chelex100法
原理:Chelex100是一種螯合樹脂,由苯乙烯、二乙烯苯共聚體組成,含有成對的亞氨基二乙酸鹽離子,起著螯合基團作用,對多價金屬離子有極強親和力。在低離子強度、鹼性及100℃煮沸條件下,可以使細胞膜裂解,並使與DNA結合的蛋白質變性,DNA游離。檢材基質中一般含有大量金屬離子,在低離子強度及加熱條件下,金屬離子可以輔助脫氧核糖核酸酶降解DNA,也可以抑制PCR反應,所以在提取DNA時,加入Chelex100,螯合了金屬離子,防止了DNA降解,提高了PCR擴增成功率。
方法:剪取適量血斑、精斑、汗斑、鼻涕斑、指甲、毛根、軟組織等等生物檢材,置於0.5ml離心管內,加入適量純水,室溫浸泡,13,000rpm離心5min,上清丟棄,管底留約20μl左右液體及檢材基質,加入100-200μl 5%Chelex100(有時需加適量PK)56℃15min至數10小時不等,100℃8min,13,000rpm離心5mim,上清備用。
評述:
1、 Chelex100法已經成為DNA提取的基本方法,Chelex100法是萬能的。目前,我們一切純化方法都在Chelex100法的基礎上進行,Chelex100法又不是萬能的。
2、 Chelex100法提取前的檢材清洗非常重要,因為現場檢材往往均較臟,臟東西可以抑制PCR反應,所以往往不止清洗一次,清洗檢材時可能損失部分DNA。所以應平衡清洗抑制劑與損失DNA之間的關系。特別強調清洗時應「把根留住」,很多情況下已知樣本DNA檢驗失敗的原因是把根沒有留住。DNA檢驗時還有另外一句名言:「一個蘿卜一個坑」,防止混亂檢材。肝素抑制PCR反應,血紅素抑制PCR反應,所以長時的浸泡、多次清洗往往可能洗除肝素及血紅素。在已知樣本多次無檢驗結果疑為肝素抗凝的情況下,多洗是檢驗成功所必須的。血紅素對普通Taq酶的抑製作用是明顯的,而目前mtDNA擴增一般用普通Taq酶,所以同一樣品除進行STR檢驗外尚需進行mtDNA檢測時,盡量去除干凈血紅素,顯得尤為重要。現場提取毛發或樣本毛發,用毛根進行STR檢驗時,純水清洗也非常重要,如果沒有清洗干凈,毛根DNA本身很少,很易檢出為混合型。因為現場毛發及樣本毛發很易粘附另一人成份。毛根清洗的特點為振盪洗滌,不離心,多換水。
3、 清洗後檢材中加入5%Chelex100量視檢材而定。檢材參考加入量
0.5×0.5cm血斑 150ul-200ul
二步法精斑 100ul
毛根 10ul
煙頭 30-50ul
4、 對於組織,難溶檢材,有疑問檢材,均可加入終濃度為100ug/ml左右PK,有時間隔一段時間,補加適量PK,PK(蛋白水解酶K)作用最佳pH為8.0。
5、加入Chelex100後,56℃浸泡時間,血斑≥15min;組織≥30min,二步法精斑≥1h。
6、PCR擴增前應離心。PCR擴增時不應吸入Chelex100,因為Chelex100為PCR抑制劑。
7、Chelex100使用濃度5%,有些人用10%,有些人用20%,各人愛好。配製好5%Chelex100 pH應在10—11之間,否則應丟棄,不應人為調整Chelex100懸液pH值。
(二)有機法
原理:有機法提取DNA一般是指用平衡酚(又叫飽和酚)、氯仿等按不同比例混合,採用不同方法提取DNA。DNA易溶於水,不溶於有機溶劑,蛋白質分子表面帶有親水性基因,很容易進行水合作用,並在表面形成一層水化層,使蛋白質分子能夠順利地進入到水溶液中,形成穩定的膠體溶液。在有機溶劑存在的情況下,破壞了蛋白質膠體溶液的穩定性,使蛋白質變性沉澱,離心後,有機溶劑於試管底層(有機相),DNA繼續穩定的存在於上層水相,蛋白質沉澱存在於兩相之間。水相中的DNA在大量冷無水乙醇及單價陽離子存在的情況下,水會溶於乙醇中,而DNA從水相中析出,沉澱,通過離心回收。有機法中常用試劑為平衡酚、氯仿,酚及氯仿作用是使蛋白質變性,氯仿的另一作用是有助於水相與有機相分離,並抽提溶於水中(有時達12%)的酚。平衡酚、氯仿及乙醇,三者互溶。
方法:剪取適量檢材,置於0.5ml離心管內,清洗方法同用Chelex100法提取DNA,加入適量純水及終濃度為100μg/ml PK,37℃-56℃孵育15min至數10小時,有時間隔一段時間補加適量PK → 13,000rpm 5min→吸上清於另一管→ 加入等體積平衡酚→振盪或顛倒徹底混勻→13,000rpm 5min→吸上清水相於另一管,加入等體積1:1混合平衡酚:氯仿→振盪或顛倒徹底混勻→13,000rpm 5min→吸上清水相於另一管→加入等體積氯仿→振盪或顛倒徹底混勻→13,000rpm 5min→吸上清水相於另一管→加入2.5倍體積冷無水乙醇冷凍保存10min以上 →13,000rpm 5-10min→棄上清→室溫涼干或100℃ 5min烤乾→加入10-20μl純水→室溫溶解或100℃5min幫助溶解→離心上清備用
評述:
1、有機法是經典DNA提取方法,目前國內外仍大量採用,其提取DNA特點為雙鏈,純度高。
2、有機法缺點是應用有毒有機試劑,對人體有害,污染環境;多次換管,容易引起檢材污染及編號混亂。有機法提取DNA的另一個缺點是不能去除某些染料,血紅素等,而這些恰好是PCR抑制劑。
⑤ 衣服上血漬洗不掉可以提取DNA嗎
是可以提取的。
⑥ 人穿過的衣服能提取DNA嗎
衣服上能否提取DNA不在於衣服本身,而是衣服上是否殘留了人的毛發,皮屑,指甲之類的含有DNA的部分。氧化的問題基本上不存在。
⑦ 懸賞:衣服上乾涸的血里提取DNA可以嗎
肯定可以,DNA非常穩定,提取可以採用實驗室使用的DNA 提取試劑盒,如果有錢就買進口的比如TAKARA的,或者oxygen都可以;國產也很多,我們實驗用的天根,效果也不錯。操作步驟就按照protocal操作就行了。
在-20冰箱放一兩個月肯定沒問題,若再長期就存放到-70冰箱!
