㈠ 在氨基酸紙層析實驗過程中為什麼不能用手接觸濾紙
因手上含有少量含氨物質，在顯色時也得出紫色斑點，污染層析結果。
㈡ 在紙層析和薄層層析中,手應拿住濾紙條和薄層板的什麼部位為什麼
手不能直接接觸硅膠面（層析面），點板時拿側邊中下部，層析時直接放瓶子里，取的時候用鑷子一夾住沒有層析液的地方。
㈢ 紙層析實驗的實驗步驟及現象
氨基酸的紙層析 一、 實驗目的 1.了解並掌握氨基酸紙層析的原理和方法。 2.學習紙層析法的操作技術，分析未知樣品氨基酸的成分。 二、 實驗原理 用濾紙為支持物進行層析的方法，稱為紙層析法，它是分配層析法的一種。紙層析所用的展層溶劑大多是由水飽和的有機溶劑組成。濾紙纖維的—OH 基的親水性基團，可吸附有機溶劑中的水作為固定相，有機溶劑作為流動相，它沿濾紙自下向上移動，稱為上行層析；反之，使有機溶劑自上而下移動，稱為下行層析。將樣品點在濾紙上進行展層，樣品中的各種氨基酸即在二相中不斷進行分配，由於它們各自的分配系數不同，故在流動相中移動速率不等，從而使不同的氨基酸得到分離和提純。紙層析法主要是依據混合組分對二相分配系數的差異進行分離，但亦存在著某種程度的吸附作用和離子交換現象。氨基酸經層析在濾紙上形成距原點不等的層析點，氨基酸在濾紙上的移動速率用Rf 表示。 Rf = 原點到層析斑點中心的距離/原點到溶劑前沿的距離 只要實驗條件(如溫度、展層溶劑的組分、pH、濾紙的質量等)不變，Rf 值是常數，因此可做定性分析參考。如果溶質中氨基酸組分較多或其中某些組分的Rf 值相同或近似，用單向層析不宜將它們分開，為此可進行雙向層析，在第一溶劑展開後將濾紙轉動90度，以第一次展層所得的層析點為原點，再用另一種溶劑展層，即可達到分離目的。由於氨基酸無色，可利用茚三酮反應使氨基酸層析點顯色，從而定性和定量。 三、儀器和試劑 儀器 層析濾紙、燒杯、剪刀、層析缸、培養皿、猴頭噴霧器、微量加樣器或毛細管、吹風機一個、直 尺、鉛筆等。 試劑 1.混合氨基酸溶液(水解後的氨基酸乾粉) 甘氨酸溶液：50mg 甘氨酸溶於5mL 水中。 蛋氨酸溶液：25mg 蛋氨酸溶於5mL 水中。 亮氨酸溶液：25mg 亮氨酸溶於5mL 水中。 氨基酸混合液： 甘氨酸50mg，亮氨酸25mg，蛋氨酸25mg 共溶於5mL 水中。 2.展層溶劑 鹼相溶劑：正丁醇∶12%氨水∶95%乙醇 = 13∶13∶13(V/V) 酸相溶劑：正丁醇∶80%甲酸∶水 = 15∶3∶2(V/V)，搖勻後放置半天以上，取上清液備用。 3.顯色貯備液： 0.4mol/L 茚三酮—異丙醇∶甲酸∶水=20∶1∶5。 4.0.1%硫酸銅：75%乙醇=2∶38，臨用前按比例混合。 四、實驗步驟 (1)標准氨基酸單向上行層析法 1.畫基線 戴上指套或橡皮手套，在長約20cm、寬約17cm 濾紙上，距短邊2.5cm 處，用鉛筆畫一條線，即為基線。 2.點樣 在原線上，從距紙的長邊4cm處開始，每隔3cm 用微量注射器或毛細管依次分別點上甘氨酸、蛋氨酸、亮氨酸和混合氨基酸溶液。點樣點干後可重復點加1～2次。每一點的直徑不超過2mm，點樣量以每種氨基酸含5～20ug 為宜。 3.展層 將點好樣的濾紙捲成筒形，濾紙兩邊不相接觸，用線固定好，將原線的下端浸入盛有溶劑的培養皿中，不需平衡可立即展層。展層劑為酸性溶劑系統，在展層溶劑中加入顯色貯備液(每10mL 展層劑加0.1～0.5mL 的顯色貯備液)進行展層，基線必須保持在液面之上，以免氨基酸與溶劑直接接觸。蓋好層析缸，當溶劑前沿距紙端2cm 時(大約3h)，取出濾紙。 4.顯色 濾紙取出後，吹乾或在80℃左右烘箱內烘3～5min，即出現紫紅色的氨基酸層析 斑點。用鉛筆劃下層析斑點，可進行定性、定量測定。 (2)混合氨基酸雙向上行紙層析法 1.濾紙准備 將濾紙裁成約28cm2的正方形，在距濾紙相鄰兩邊各2cm 處的交點上，用鉛筆劃下一點，做為原點。 2.點樣 取混合氨基酸溶液(5mg/mL)10～15μL，分別點在原點上。 3.展層與顯色 將點好樣的濾紙捲成半筒形，立在培養皿中，原點應在下端。取少量12%的氨水與小燒杯中，蓋好層析缸，平衡過夜。次日，取出氨水，加適量鹼相溶劑(第一向)與培養皿中，蓋好層析缸，上行展層，當溶劑前沿距濾紙上端1～2cm 時，取出濾紙，冷風吹乾。將濾紙轉90o，再捲成半筒形，豎立在干凈培養皿中，並於小燒杯中至少量酸相溶劑，蓋好層析缸，平衡過夜，次日將加顯色劑的酸性溶劑(每10mL 展層劑加0.1～0.5mL 的顯色貯備液)傾入培養皿中，進行第2向展層。展層畢，取出濾紙，用熱風吹乾，藍紫色斑點即顯現。 五、計算 單向層析的Rf 值，按 「Rf = 原點到層析斑點中心的距離/原點到溶劑前沿的距離」計量後計算。雙向層析Rf 值，由兩個數值組成，在第一向計量一次，第二向計量一次，分別與已知的氨基酸在酸鹼系統的Rf 值對比，即可初步決定它為何種氨基酸的斑點，將它剪下，在同一張紙剪下一塊大小相同的空白紙作為對照，用硫酸銅—乙醇溶液洗脫，用722型分光光度計測定其吸光度，在標准曲線上查出氨基酸的含量。
㈣ 紙層析法分離氨基酸實驗中展層時間的長短對結果有什麼影響
氨基酸離鑒定——紙層析 ,實驗目 掌握氨基酸紙層析原理,析待 測品氨基酸. 二,實驗原理 紙層析濾紙惰性支持物配層析.濾紙纖維羥基具親水性,吸附層水作固定相,機溶劑流相.機相流經固定相,物質兩相間斷配離. 溶質濾紙移速度用Rf值表示: Rf=原點層析斑點距離/原點溶劑前沿距離 定條件某種物質Rf值數.Rf值與物質結構,性質,溶劑系統,層析濾紙質量層析溫度等素關.本實驗利用紙層析離氨基酸. 三,實驗器材 (1)燒杯(5000mL):1/組 (2)微量注射器(100 L):1/ 組. (3)噴霧器:公用. (4)培養皿:1/組. (5)層析濾紙(22cm,寬14cm新華號濾紙):1張/組. (6)直尺,鉛筆:自備. (7)電吹風:1/組. (8)托盤,針,白線:1套/組. (9)手套:1雙/組. (10)塑料薄膜:公用. (11)燒杯:50mL,1/組. 四,實驗試劑 (1)擴展劑:4體積丁醇1體積冰醋酸放入液漏斗,與5體積水混合,充振盪,靜置層,棄層水層. (2)氨基酸溶液:0.5%已知氨基酸溶液3種(賴氨酸,苯丙氨酸,纈氨酸),0.5%待測氨基酸液1種. (3)顯色劑:0.1%水合茚三酮丁醇溶液. 實驗試劑 五,實驗操作 檢查培養皿否乾燥,潔凈;若否,其洗凈並置於乾燥箱內120℃烘乾. (1)平衡:剪塊塑料薄膜鋪桌面,層析缸或燒杯置於塑料薄膜,再盛約20mL展層溶液燒杯置於倒置層析缸或燒杯,用塑料薄膜密封起,平衡20min. (2)規劃:帶手套,取寬約14cm,高約22cm層析濾紙張.紙端距邊緣2cm處輕輕用鉛筆劃條平行於底邊直線A,直線做4記號,記號間間隔2cm,原點位置.另距左邊緣1cm處畫條平行於左邊緣直線B,B線A,B兩線交點原點標明刻度(厘米單位),參見左圖. (3)點:用微量注射器別取10mL左右氨基酸品(每取前都要用蒸餾水洗滌微量注射器,免交叉污染),點四位置.擠滴點,同位置需點2～3,2～3mL/,每點完點,立刻用電吹風熱風吹乾再點,保證每點紙擴散直徑超3mm.每須點4,其3已知,1待測品. (4)層析:用針,線濾紙縫筒狀,紙兩側 邊緣能接觸且要保持平行,參見圖3-3.向培養皿加入擴展劑,使其液面高度達1cm左右,點濾紙筒直立於培養皿(點端,擴展劑液面A線約1cm),罩燒杯,仍用塑料薄膜密封.擴展劑升A線始計,每隔定間測定擴展劑升高度,填入表3-1.升15～18cm,取濾紙,剪斷連線,立即用鉛筆描溶劑前沿線,迅速用電吹風熱風吹乾. (5)顯色:用噴霧器通風廚向濾紙均勻噴0.1%茚三酮丁醇溶液,立即用熱風吹乾,即顯各層析斑點,參見左圖. (6)計算各種氨基酸Rf值,並判斷混合品都哪些氨基酸,各自實驗結貼實驗報告,見表3-2. (7)層析間橫坐標,擴展劑升高度縱坐標畫圖,求擴展劑升18cm所需要間. (8)微量注射器內外用蒸餾水清洗干凈,倒掉用展層液平衡液,培養皿洗凈,整理桌面儀器試劑
㈤ 用分配層析法分離氨基酸應注意哪些問題,為什麼
氨基酸的分離鑒定——紙層析法
一,實驗目的
掌握氨基酸紙層析的方法和原理,學會分析待
測樣品的氨基酸成分.
二,實驗原理
紙層析是以濾紙為惰性支持物的分配層析.濾紙纖維上的羥基具有親水性,吸附一層水作為固定相,有機溶劑為流動相.當有機相流經固定相時,物質在兩相間不斷分配而得到分離.
溶質在濾紙上的移動速度用Rf值表示:
Rf=原點到層析斑點中心的距離/原點到溶劑前沿的距離
在一定的條件下某種物質的Rf值是常數.Rf值的大小與物質的結構,性質,溶劑系統,層析濾紙的質量和層析溫度等因素有關.本實驗利用紙層析法分離氨基酸.
三,實驗器材
(1)大燒杯(5000mL):1隻/組
(2)微量注射器(100 L):1隻/ 組.
(3)噴霧器:公用.
(4)培養皿:1隻/組.
(5)層析濾紙(長22cm,寬14cm的新華一號濾紙):1張/組.
(6)直尺,鉛筆:自備.
(7)電吹風:1隻/組.
(8)托盤,針,白線:1套/組.
(9)手套:1雙/組.
(10)塑料薄膜:公用.
(11)小燒杯:50mL,1隻/組.
四,實驗試劑
(1)擴展劑:將4體積正丁醇和1體積冰醋酸放入分液漏斗中,與5體積水混合,充分振盪,靜置後分層,棄去下層水層.
(2)氨基酸溶液:0.5%的已知氨基酸溶液3種(賴氨酸,苯丙氨酸,纈氨酸),0.5%的待測氨基酸液1種.
(3)顯色劑:0.1%水合茚三酮正丁醇溶液.
實驗試劑
五,實驗操作
檢查培養皿是否乾燥,潔凈;若否,將其洗凈並置於乾燥箱內120℃烘乾.
(1)平衡:剪一大塊塑料薄膜鋪在桌面上,將層析缸或大燒杯到置於塑料薄膜上,再把盛有約20mL展層溶液的小燒杯置於倒置的層析缸或大燒杯中,用塑料薄膜密封起來,平衡20min.
(2)規劃:帶上手套,取寬約14cm,高約22cm的層析濾紙一張.在紙的下端距邊緣2cm處輕輕用鉛筆劃一條平行於底邊的直線A,在直線上做4個記號,記號之間間隔2cm,這就是原點的位置.另在距左邊緣1cm處畫一條平行於左邊緣的直線B,在B線上以A,B兩線的交點為原點標明刻度(以厘米為單位),參見左圖.
(3)點樣:用微量注射器分別取10mL左右的氨基酸樣品(每取一個樣之前都要用蒸餾水洗滌微量注射器,以免交叉污染),點在這四個位置上.擠一滴點一次,同一位置上需點2～3次,2～3mL/次,每點完一點,立刻用電吹風熱風吹乾後再點,以保證每點在紙上擴散的直徑最大不超過3mm.每人須點4個樣,其中3個是已知樣,1個是待測樣品.
(4)層析:用針,線將濾紙縫成筒狀,紙的兩側
邊緣不能接觸且要保持平行,參見圖3-3.向培養皿中加入擴展劑,使其液面高度達到1cm左右,將點好樣的濾紙筒直立於培養皿中(點樣的一端在下,擴展劑的液面在A線下約1cm),罩上大燒杯,仍用塑料薄膜密封.當擴展劑上升到A線時開始計時,每隔一定時間測定一下擴展劑上升的高度,填入表3-1中.當上升到15～18cm,取出濾紙,剪斷連線,立即用鉛筆描出溶劑前沿線,迅速用電吹風熱風吹乾.
(5)顯色:用噴霧器在通風廚中向濾紙上均勻噴上0.1%茚三酮正丁醇溶液,然後立即用熱風吹乾,即可顯出各層析斑點,參見左圖.
(6)計算各種氨基酸的Rf值,並判斷混合樣品中都有哪些氨基酸,各人將自己的實驗結果貼在實驗報告上,見表3-2.
(7)以層析時間為橫坐標,擴展劑上升高度為縱坐標畫圖,求出擴展劑上升到18cm時所需要的時間.
(8)將微量注射器內外用蒸餾水清洗干凈,倒掉用過的展層液和平衡液,將培養皿洗凈,整理好桌面上的儀器和試劑
㈥ 做紙色譜實驗時，手拿濾紙應注意什麼為什麼
你好，
這是因為我們的手會出汗，汗液中有水，無機鹽離子，脂肪，氨基酸及多肽等。會對色譜層析產生很大影響。
希望對你有所幫助！
不懂請追問！
望採納！